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细胞培养注意事项有哪些(基础级)

发布日期:2022-05-11 22:36   来源:未知   阅读:
 

  1、 细胞房和生物安全柜(或超净工作台)先开紫外照射30min。作用:对环境灭菌(空气)。(备注:如果着急,至少也要开15分钟)

  在做实验之前考虑好需要哪些物品。开始照射之前,将所需要用到的物品都放到生物安全柜(或超净工作台)里面。

  细胞培养箱一般都已经调整好。定期留意一下二氧化碳是否足够。不够及时更换。

  3、 进入实验之前,首先给自己带上拖鞋、头套,口罩,实验服,手套(手套带双层)。注意:手套要将袖口套进去。实验服、拖鞋最好是细胞房专用。

  首先观察细胞培养液的颜色。现在的细胞培养液通常都放有酸碱指示剂(绝大部分是酚红)。细胞在培养生长过程中,不断在培养液上清中累积酸性物质,时间长了,培养液变为黄色(同时培养液中营养物质耗尽)。

  其次镜下观察细胞的生长状态是否良好,是否需要传代。如果生长状态不好,需要对培养液进行调整(一般是加大血清浓度)。过于密集出现大片融合或太密集而导致细胞脱落,则进行传代。

  如果长势良好,且细胞培养液颜色未发生变化,可以酌情进行1/2、 1/3、1/4换液,也可以全换液。总之,视细胞生长情况而定。

  第一是配制溶液过程中要用到的水。水用纯水,高压灭菌之后,再去内毒素。去内毒素方法很多,最简单可以放在烘箱180度3小时。或者过去内毒素的柱子后,高压灭菌。

  抗生素用去内毒素水配制后,直接过滤除菌(过0.22u滤头)。可以用一次性无菌注射器过一次性0.22u滤头。

  现在用的培养液,如果是商业化液体培养基,不用处理。如果是粉末,需要用去内毒素水在生物安全柜(或超净工作台)进行配制,再过滤除菌。可以先配浓缩液(如10×),过滤除菌后。再用灭菌去内毒素水稀释成1×培养液。

  培养液加上合适比例的血清即可。但血清一般保存于-20℃,一般解冻是放在4℃冰箱解冻,耗时长,而且必须解决完全之后,才能进行完全培养基的配制。所以要提前几个小时就将血清从-20℃转入4℃,以期完全解冻。当然如果这一次就需要用完的话(是指用这些血清配制的培养液都用完),也可以放到37℃解冻。

  液体必须要分装。无论过程中用到的培养液、胰酶、血清、PBS、生理盐水、抗生素尽量分装。分装是为了防止污染。如果操作有误,仅能威胁到其中一支,而非整个。

  第五,操作之前,培养液先放到37度的细胞培养箱里复温。原因:尽量减少对细胞的刺激。低温对于细胞也是一个刺激因素。

  第六,操作之前,大脑先过一遍此次操作所需要用到的所有用具。将所有用具先放到无菌台面上。减少拿入拿出的动作,保证无菌。(如果万一发现少拿了什么,也不要紧,再加上就是。如果是枪头盒、移液管等用具,最好先用消毒酒精喷一下)。

  第七,操作之前,带着的手套先喷消毒酒精。然后再进入工作台。等一分钟,等手套上的酒精挥发之后再进行操作。

  第一,经常观察。最好是每天都显微镜下看一看,确定细胞状态。然后该换液换,该传代传,不用理会的就原样放回去。如果好几天都不想理会,可以放不完全培养基,或者低血清浓度的培养液,维持细胞生存,但不增殖。

  第二,是否加抗生素。这个视情况而定。细胞培养过程中,是要求尽量少添加不相关的杂质。抗生素对于细胞来说,也是一种负担。但如果环境比较污染,直接添加好了。好比没病不用吃药,感冒了还是要吃药;婴儿没病但还是要打疫苗。

  第三,胎牛血清的解冻。血清一般保存于-20℃,要放在4℃冰箱解冻,耗时长,500mL要好几个小时,我们经常是头天离开实验室之前放到4℃冰箱,过夜。所以经常分装成10mL或者20mL。这样,上午放到4℃冰箱,下午就可以用了。

  第二,是否一定要细胞房。以及是否要完全严格的遵守种种器具专用。这个吧,见仁见智。凡所有种种措施及设备都是为了保证培养操作过程中无菌,减少感染的机率;专用试剂耗材保证无菌无内毒素。细胞房也是这么一个措施而已,其它试剂耗材也是;我们没有专门的细胞房也这么养。

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  刚开始我们实验室也是没有专用的生物安全柜和细胞房,拖鞋什么的也没办法专用,没有加抗生素,照样养得好好的。但是,交叉养,还是需要注意,一是时间上分隔开来:每天细胞培养先操作。其它细菌之类操作靠后,且操作后消毒酒精台面消毒,紫外照射1小时。二是其它操作要小心,避免带入污染。当然,如果有必要加抗生素,还是尽早加,比细胞污染了再去抢救要来得好。

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